植物脱落酸(ABA)联免疫分析(ELISA)-分析方法-资讯-生物在线

植物脱落酸(ABA)联免疫分析(ELISA)

作者:上海逸峰生物科技有限公司 2011-12-23T00:00 (访问量:1364)

植物脱落酸(ABA联免疫分析ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:植物脱落酸(ABA联免疫分析试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于测定植物相关样本中脱落酸(ABA含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中植物脱落酸(ABA水平。用纯化的植物脱落酸(ABA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的植物脱落酸(ABA标准品和未知浓度的植物脱落酸(ABA待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物脱落酸(ABA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物脱落酸(ABA)浓度。

试剂盒组成

1

20倍浓缩洗涤液

50ml×1

9

标准品S160μg/L

0.5ml×1

2

链霉亲和素-HRP

6ml×1

标准品S240μg/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

标准品S320μg/L

0.5ml×1

4

生物素标记的抗-IgG抗体

6ml×1

标准品S410μg/L

0.5ml×1

5

显色剂A

6ml×1

标准品S5g/L

0.5ml×1 

6

显色剂B

6ml×1/

10

密封袋

1

7

终止液

6ml×1

11

封板膜

3

8

样品稀释液

6ml×1

12

说明书

1

标本要求

1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

2.       加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37温育45分钟。

3.       配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.       洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

5.       加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl37温育30分钟

6.       洗涤:操作同4

7.       加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37温育30分钟。

8.       洗涤:操作同4

9.       显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

10.   终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.   测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

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联系人: 陈锋

电 话: 86-021-31665985

传 真: 86-021-51862175

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