羊布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)酶联免疫分析(ELISA)-分析方法-资讯-生物在线

羊布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)酶联免疫分析(ELISA)

作者:上海逸峰生物科技有限公司 2011-12-23T00:00 (访问量:1500)

布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)酶联免疫分析ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)的含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)标准品和未知浓度的布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人布鲁氏杆菌IgG抗体(Brucella IgG)浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

8

标准品S190 ng/L

0.5ml×1

2

链霉亲和素-HRP

6ml×1

标准品S260ng/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

标准品S330ng/L

0.5ml×1

4

生物素标记的抗-IgG抗体

6ml×1

标准品S415ng/L

0.5ml×1

5

显色剂A

6ml×1

标准品S57.5ng/L

0.5ml×1 

6

显色剂B

6ml×1/

9

说明书

1

7

终止液

6ml×1

10

封板膜

2

标本要求

1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

2.       加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl在样本反应孔中加入50微升样本,盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37温育45分钟。

3.       配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4.       洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

5.       加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl37温育30分钟

6.       洗涤:操作同4

7.       加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37温育30分钟。

8.       洗涤:操作同4

9.       显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

10.   终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.   测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本

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