人线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)ELISA试剂盒-分析方法-资讯-生物在线

人线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)ELISA试剂盒

作者:上海逸峰生物科技有限公司 2011-06-21T00:00 (访问量:1346)

       线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)

    酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆,细胞上清及相关液体样本中线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)的活性。

实验原理:

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)水平。用纯化的人线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶),再与HRP标记的线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人线粒体呼吸链复合物5(NADH-辅酶Q还原酶)浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

封板膜

2片(48

2片(96

密封袋

1

1

酶标包被板

1×48

1×96

2-8保存

标准品:360U/mL

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl

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